Verbundprojekt: Nanoengineered exosomes to treat glioma (GlioEx) - Teilvorhaben: Optimisation of exosome preparation and target cell fusion capacity

Das Projekt ist Teil eines Verbundantrags zur zielzellspezifischen Therapie maligner Gliome, bei der Nanopartikel (Exosomen) mit Therapeutika sowie Oberflächenproteinen beladen werden, die eine zielzellspezifische Freisetzung der Therapeutika erlauben. Für die therapeutische Anwendung von Exosomen bei Gliomen müssen zum einen Exosomen in ausreichend hoher Menge isoliert werden, zum anderen muss sichergestellt werden, dass die mit Therapeutika beladenen Vesikel ihren Inhaltsstoff effizient in das Zytosol der Gliomzellen freisetzen. Der Fokus liegt bei der Optimierung der Exosomenaufreinigung, u.a. mit verschiedenen Zentrifugations- und Immunaufreinigungsverfahren, um eine möglichst effiziente Isolierung zu erzielen. Exosomen können ihren Inhalt sowohl durch Endozytose als auch durch Membran-Fusion an Zielzellen abgeben, aber endozytierte Exosomen werden großteils im Lysosom degradiert. Dagegen erlaubt die Fusion von Exosomen an der Membran eine direkte Freisetzung des Inhalts in das Zytosol der Zielzellen. Die exosomalen Protein- Determinanten, die eine Membranfusion mediieren, sind größtenteils unbekannt und sollen in einem Kandidaten-basierten Screeningansatz identifiziert werden. Daher werden wir den Einfluss verschiedener viraler Fusionsproteine auf die Fusion von Exosomen mit Membranen der Zielzellen testen. Die cDNA exosomaler Fusionsproteine wird in Zellen überexprimiert und ihr Einfluß auf Fusion und Freisetzung von exosomalen Inhaltsstoffen bestimmt.